Accutase™

Die Farbe Ihrer Accutase™ wird durch Phenolrot hervorgerufen und hängt vom pH-Wert ab. Während des Transports ist es möglich, dass kleine Mengen CO₂ in die Kunststoffflasche eindringen, die den pH-Wert verringern können. Dies kann zu einer leichten Gelbfärbung führen.

Der ursprüngliche pH-Wert beträgt 7,3, doch kann es während des Transports zu einer Veränderung des pH-Werts auf 6,8 kommen. Dies ist nichts, worüber Sie sich Sorgen machen müssen, da es die Leistung Ihrer Accutase™ nicht beeinträchtigt.

Ja, die Verwendung ist weiterhin problemlos möglich.

Die einzelnen Komponenten tauen nicht gleichmäßig auf, daher ist es möglich, dass Sie eine ungleichmäßige Farbverteilung in der Flasche beobachten können. Stellen Sie einfach sicher, dass Sie das Produkt nach dem Auftauen durch leichtes Schütteln (vorzugsweise durch Invertieren) gut mischen.

Ja, Sie können Accutase™ verwenden, um Zellklumpen aufzulösen.

Wenn Sie mit Accutase™ keinen Erfolg haben sollten, können Sie stattdessen Accumax™ verwenden – es enthält die gleichen Enzyme, jedoch in einer höheren Konzentration.

Wenn Sie Ihre Accutase™ in einem +37 °C Wasserbad aufgetaut haben und eine Temperatur von +37 °C nicht erreicht wurde, ist sie möglicherweise noch in Ordnung (eine reduzierte Aktivität ist jedoch möglich). Wenn Sie das Produkt auf +37 °C erhitzt haben, hat es definitiv seine Enzymaktivität verloren.

Bitte prüfen Sie, ob Ihre Accutase™ noch brauchbar ist und entsorgen Sie ggf. das beschädigte Produkt.

Nein, das ist nicht notwendig.

Vor der Ablösung gießen/saugen Sie einfach das Medium ab und fügen Accutase™ hinzu. Nach der Ablösung können Sie einfach frisches Medium zu den abgelösten Zellen geben.

Die Inkubationszeiten sind ähnlich wie bei Trypsin, Sie können einfach so vorgehen, wie Sie es bereits gewohnt sind!

Machen Sie sich keine Sorgen über eine Überexposition Ihrer Zellen mit Accutase™ - sie ist sehr sanft und Ihre Zellen sollten keinen Schaden nehmen, selbst wenn Sie sie über einen längeren Zeitraum exponieren.

Wir raten Ihnen, die optimale Ablösungs-/Expositionszeit für Ihre Zellen individuell zu bestimmen!

Ihre Accutase™/Accumax™-Produkte sollten im (teil-)gefrorenen Zustand bei Ihnen eintreffen. Beim Auftauprozess wird die Farbe von gelb zu Orange übergehen.

Nach dem Auspacken können Sie das Produkt sofort wieder einfrieren oder es zum Auftauen in den Kühlschrank legen.

• Tauen Sie Accutase/Accumax™ niemals in einem +37 °C Wasserbad auf - dies schadet dem Produkt erheblich!
• Über Nacht im Kühlschrank auftauen lassen oder für etwa 1,5 Stunden in ein Wasserbad mit kaltem Leitungswasser stellen.
• Denken Sie nach dem Auftauen immer daran, die Flasche zu schütteln, damit sich die einzelnen Bestandteile beim Auftauen homogen in der Lösung verteilen.
• Accutase/Accumax™ ist im Kühlschrank 2 Monate lang stabil, daher ist eine Aliquotierung nicht erforderlich. Das erneute Einfrieren von Aliquots ist jedoch möglich.

1. Saugen Sie das Medium aus der Kulturschale ab.
2. 2 mL Accutase™ in die Kulturschale geben.
3. 2 bis 5 Minuten bei +37 °C inkubieren, bis sich die einzelnen Zellen zu runden beginnen.
4. Spülen Sie die Platte vorsichtig ab, um die Zellen von der Oberfläche der Platte zu entfernen.
5. Zellsuspension in ein konisches 15 mL-Röhrchen überführen.  Vorsichtig auf- und abpipettieren, bis die Zellen eine einzige Zellsuspension bilden.
6. Geben Sie 8 ml Medium hinzu, um die restlichen Zellen von der Oberfläche der Schale abzuspülen, und übertragen Sie sie in das konische Röhrchen (aus Schritt 5).
7. Nehmen Sie eine 20-µl-Probe der Zellsuspension, um die Dichte der lebensfähigen Zellen zu bestimmen.
8. Zentrifugieren Sie das konische Röhrchen mit der Zellsuspension bei 200 x g für 4 Minuten.
9. Überstand absaugen, in frischem Medium resuspendieren und auf beschichtete Schalen plattieren.  Bei +36 bis +38 °C in einer befeuchteten Atmosphäre von 4 bis 6 % CO₂ inkubieren.

1. Die Neurosphären-Zellsuspension aus der Kulturschale nehmen und in ein konisches 15 mL-Röhrchen überführen.
2. Lassen Sie die Neurosphären im Röhrchen absetzen (~2 bis 5 Minuten), bevor Sie mit Schritt 3 fortfahren. Alternativ können die Zellen auch 1 Minute lang bei 100 x g zentrifugiert werden.
3. Saugen Sie das Medium vorsichtig ab, sodass die Neurosphären am Boden des Röhrchens verweilen und etwa 100 µl des Mediums übrig bleiben.
4. Neurosphären in 5 mL DPBS resuspendieren.
5. Lassen Sie die Neurosphären im Röhrchen absinken (~2 bis 5 Minuten), bevor Sie mit Schritt 6 fortfahren. Alternativ können die Zellen auch 1 Minute lang bei 100 x g zentrifugiert werden.
6. Saugen Sie das DPBS vorsichtig ab, sodass die Neurosphären am Boden des Röhrchens verweilen und etwa 100 µl DPBS übrig bleiben.
7. Geben Sie 1 mL Accutase™ zu den Neurosphären und inkubieren Sie sie 10 Minuten bei Raumtemperatur.
8. Mithilfe einer Pipettenspitze der richtigen Größe (z. B. 1000 µl) auf und ab pipettieren, bis alle Neurosphären in einer einzigen Zellsuspension vorliegen.
9. Geben Sie 4 mL frisches Medium in das Röhrchen.
10. Die Zellen 4 Minuten lang bei 200 x g zentrifugieren.
11. Saugen Sie den Überstand vorsichtig ab.
12. Die Zellen in frischem Medium resuspendieren, in eine neue Kulturschale überführen und bei +36 bis +38 °C in einer befeuchteten Atmosphäre von 4 bis 6 % CO₂ inkubieren.